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諾氟沙星含量測定

點擊次數(shù):5271 發(fā)布時間:2012-03-30

 

一、實驗方法
Cometro液相色譜系統(tǒng);
紫外檢測器波長:278nm;
Kromasil C18 250*4.6mm 5u 色譜柱;
柱溫:25;
流動相:0.025mol/L磷酸溶液(用三乙胺調pH=3.0):乙腈=87:13
流速:1.00ml/min;
諾氟沙星對照品-0.15mg/ml,樣品;
進樣量:對照品分別進樣5ul,7.5ul10ul,12.5ul15ul3次,樣品進樣10ul,使樣品與標準品1:1混合再進樣10ul,考察線性相關性,保留時間重現(xiàn)性,回收率。
二、譜圖結果
 
 

 

 
附進樣量,保留時間,峰面積關系表:

進樣量
保留時間/min
峰面積/103
標準品5ul
10.533
728.12
標準品7.5ul
10.541
979.1
標準品10ul
10.528
1230.741
標準品12.5ul
10.524
1460.44
標準品15ul
10.401
1732.42
樣品10ul
10.517
1029.987
樣品標準品11混合10ul
10.213
1120.78

 
三、結果運算
1、保留時間重現(xiàn)性考察:

保留時間
10.533
10.541
10.528
10.524
10.401
RSD
0.5588%
             

 
2、線性相關性考察及樣品含量計算:
以標準品進樣量為橫坐標,峰面積為縱坐標,得線性方程:

 
由此可算出樣品中諾氟沙星含量0.1205mg/ml。
3、回收率考察:
根據(jù)上面線性方程可算出混合后樣品含諾氟沙星0.1342mg/ml,而實際真值是0.1352mg/ml,因此得回收率為99.20%。
四、綜述
1、此三項考察綜合考察了Cometro 6000 PVW UV/VIS檢測器的吸收穩(wěn)定性,Cometro 6000 LDI泵的流量性,進樣伐、進樣針的性,Kromasil色譜柱的性。
2、本實驗流動相中三乙胺看似作用是調節(jié)pH,其實際zui大作用是調整峰型,因為諾氟沙星有含氮性基團,在酸性環(huán)境中容易與色譜柱中的硅羥基產生靜電作用而拖尾,如下圖:
而三乙胺可以代替物質與硅羥基作用,了物質的峰型。因此調節(jié)pH時候得注意三乙胺的加入量,不能過少,可以直接加入適量三乙胺,再用磷酸調節(jié)pH。

 

 

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